α－和β－双重地中海贫血的
PGD助孕治疗
医院生殖医学中心，
广东省生殖医学重点实验室
作者：沈晓婷曾艳红丁晨晖李荣
王静周灿权徐艳文
病史女方，29岁；男方，27岁。G2P0A2。年结婚，同年于孕19+周因产前诊断发现胎儿为重型β－地中海贫血患胎行引产术。年2月再次于孕13+周因胎儿为重型β－地中海贫血患胎行引产术。后避孕至今。
女方为HbH病患者（--SEA/ααCS）,同时携带β－地中海贫血（CD17）杂合突变；男方为α-地中海贫血(-α3.7)杂合缺失复合β－地中海贫血（CD71-72）杂合突变。双方染色体核型正常，前来生育咨询。女方既往无特殊病史，平素月经规则，周期28-30天，持续3-4天，量中，无痛经及性交痛。
临床印象α－地贫和β－地贫双重遗传病生育风险。
治疗或建议1遗传咨询患者夫妇双方在优生遗传咨询门诊行遗传咨询，被告知α-地中海贫血和β－地中海贫血均为常染色体隐性遗传性疾病，其致病基因分别为α-珠蛋白基因和β－珠蛋白基因。根据双方携带致病基因的类型，生育后代可出现以下类型：
α－地中海贫血：1/2为α－地中海贫血（--SEA）携带者，1/4与母亲相同为HbH病（--SEA/ααCS），1/4为HbH病（ααCS/-α3.7）。
β－地中海贫血：1/4为正常，1/2为β－地中海贫血携带者，1/4为重型地贫患者
子代患病风险：无严重疾病表型的比率为1/2(--SEA/αα地中海贫血携带者)×3/4(β－地中海贫血携带者）＝3/8。
建议可供选择的生育方案：
自行妊娠后，于孕18周抽羊水行产前基因诊断；
胚胎植入前遗传学诊断（PGD）助孕。
经过充分知情同意，夫妇选择PGD助孕。
2PGD治疗准备：
①由于引产胎儿的DNA标本无法取得，女方为HbH患者，男方(-α3.7)杂合缺失，根据遗传规律：后期胚胎中1/2为HbH患者，1/2为轻型携带者。该家系可考虑移植的胚胎需遗传男方的正常链，提供了男方完整信息用于连锁分析。
在该家系中男方父亲为(-α3.7)杂合缺失、男方母亲α－地贫未见异常，男方异常的α－地贫单体型来源于其父亲。因此，我们抽取女方、男方及男方父母的外周血DNA进行了单体型分析；
②夫妇双方常规IVF术前准备。
治疗经过：
选择常规长方案行促排卵，共获卵20枚，17枚成熟卵，行ICSI后13枚正常受精，共形成10枚达到活检标准的囊胚，再活检后冻存。活检得到的滋养外胚层细胞（每个囊胚活检5-10个细胞）经单细胞全基因组扩增后，采用IonPersonalGenomeMachine1(PGM?)测序平台进行NGS检测（同时检测α－地贫、β－地贫及染色体拷贝数检测），确定两种地贫的基因型，选择一枚双重杂合子的轻型胚胎在解冻周期植入，2周后抽血检测β-HCG阳性，孕7周B超提示宫内单胎妊娠。
NGS检测结果：
对夫妇双方、男方父母及10个胚胎的全基因组扩增产物均进行了检测，1枚胚胎为双重杂合子的轻型胚胎（可用）。
图1根据SNP行α－地贫单体型分析结果图示
（单体型颜色红色表示致病链，“深红”为男方致病链，“鲜红”为女方致病链，“浅粉”为女方cs致病链）
图2SNP行α－地贫单体型分析结果举例
（位点：女方的致病位点cs。实线：SEA缺失区域范围，双横线位置：3.7缺失区域位置。
单体型颜色红色致病链，“深红”：男方致病链，“鲜红”为女方致病链，“浅粉”为女方cs致病链）
图3母源突变位点c.TCSanger测序图
（“红框”表示直接基因检测女方致病位点CS的结果。W7、W9、W10发生脱扣，一代验证无结果。）
图4SNP行β－地贫单体型分析结果举例
（位点表示女方的致病位点位置，浅紫色A表示突变碱基(CD17)。横线位置表示HBB基因位置。单体型颜色红色表示致病链，“深红”为男方致病链，“鲜红”为女方致病链
3产前诊断孕妇孕4+月抽取羊水行地中海贫血产前诊断及染色体分析，提示诊断结果与NGS-PGD诊断结果相符。
点评1、α-地中海贫血和β－地中海贫血均为常染色体隐性遗传性疾病。本案例夫妇曾因重度地贫患胎引产两次，临床诊断明确。该病例女方为HbH病患者（--SEA/ααCS）,同时携带β－地中海贫血（CD17）杂合突变；男方为α-地中海贫血(-α3.7)杂合缺失复合β－地中海贫血（CD71/72）杂合突变携带者。
综合分析其生育基因表型正常子代的比率为3/8，具有PGD指征。对于α-地贫的单体型分析，由于女方为HbH患者，无论如何遗传给子代的均为携带致病基因的单体型，因此我们仅需对男方的单体型进行区分。
由于引产胎儿DNA标本无法获得，因此我们结合男方父母的夫妇α-地贫诊断结果及NGS检测致病位点(-α3.7)的结果来区分父源性的α-地贫单体型。
2、单基因疾病PGD传统的方法是通过PCR法检测。早在年，我们中心就采用多重置换扩增结合短串联重复序列多态性进行α和β－复合地贫的PGD，但该诊断方法采用单重荧光PCR，每个胚胎均需6-7个PCR反应，耗费较大的人力资源，而且操作繁琐。
近年来我们中心采用新的一代测序技术可以同时进行数十个SNP位点定位，大大减少了准备工作量，同时诊断准确性也明显提高，而且可以同时进行PGS检测，已逐渐成为我们中心罕见或复杂单基因病PGD的主流方向。
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